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ECL Plus 高敏發(fā)光液 說(shuō)明書

更新時(shí)間:2024-08-23      點(diǎn)擊次數(shù):632

ECL高敏發(fā)光液 .jpg

  ECL Plus®超敏發(fā)光液用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了BIOHUB核心技術(shù)基于“熒光震蕩"機(jī)理設(shè)計(jì)的發(fā)光底物系統(tǒng)??赏℉RP實(shí)現(xiàn)低皮克級(jí)(以HRP濃度為準(zhǔn))的免疫印跡檢測(cè),其靈敏度,發(fā)光時(shí)間和背景均明顯優(yōu)秀。

1. 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體。

2. 簡(jiǎn)單易用— 可替代其它公司的ECL發(fā)光底物,操作步驟無(wú)需進(jìn)行特別優(yōu)化

3. 靈敏度更高— 可檢測(cè)低皮克級(jí)的蛋白

4. 信號(hào)持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)— 光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)

5. 更多成像方法— 適用于X射線膠片、CCD或激光成像儀

6. 價(jià)格更經(jīng)濟(jì)— 相比其他品牌的類似產(chǎn)品,不僅具有高品質(zhì)和高性能,同時(shí)價(jià)格也更低

產(chǎn)品性質(zhì)

      用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。

      安全性:無(wú)特殊毒性,按普通化學(xué)品處理。 

使用方法

1. 執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。

 注:優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽(yáng)性結(jié)果。

1) 將一抗?jié)舛认♂尩?.05~1ug/ml

2) 將二抗?jié)舛认♂尩?.005~0.04ug/mL

3) 將兩種底物組份按1:1比例混合,制備底物工作液。

注:暴漏于日光或任何其他強(qiáng)光可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長(zhǎng)期暴漏于任何強(qiáng)光。短時(shí)間暴漏于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。

4) 將印跡膜在ECL底物工作液中孵育5分鐘。

5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。

6)  使印跡膜在X光膠片上曝光。

2. Western Blot最后一次洗膜的同時(shí)新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜干燥。將膜浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中,與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度,有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng),使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行,也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

4. 用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5. 打開X光膠片暗盒,在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來(lái)包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),蛋白帶面向上。

6. 暗房?jī)?nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。      

注意事項(xiàng)

(1)步驟1~5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

(2)長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量,將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏,強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000??贵w濃度過(guò)高將造成高背景或沒有條帶,導(dǎo)致失敗。

(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光,應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。

(6)使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3,如必需使用勿超過(guò)0.01%。 

(8) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

(9) 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。


貨號(hào)
品名規(guī)格品牌
78CI10001ECL Plus 高敏發(fā)光液100ml、500mlBiohub



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