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簡要介紹熒光染料的應(yīng)用

更新時間:2023-08-24      點擊次數(shù):448

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熒光染料在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。泛指吸收某一波長的光波后能發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì)。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。

熒光染料的應(yīng)用:

工業(yè)應(yīng)用:熒光染料可用作洗衣粉中的增白劑、各種熒光路標漆等熒光染料產(chǎn)品的制備。此外還用于纖維織物印染和某些特殊標志的制作。

科研應(yīng)用:熒光染料在科研中常用于熒光免疫、熒光探針、細胞染色等。包括特異性的DNA染色,用于染色體分析、細胞周期、細胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復(fù)染劑,可作為背景對照,標記細胞核使細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。

在免疫分析中熒光標記的單克隆抗體技術(shù)為流式細胞儀在研究細胞膜和細胞內(nèi)各種功能性抗原、腫瘤基因蛋白等領(lǐng)域擴展了無限的應(yīng)用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價結(jié)合在單克隆抗體上。

在核酸檢測中熒光染料對細胞核染色后定量測量細胞所發(fā)出的熒光強度,就可以確定細胞核中DNA、RNA的含量,并可以對細胞周期和細胞的增殖狀況進行分析。有多種熒光染料可以對細胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

常用熒光染料:

(一)免疫熒光標記常用的熒光染料

FITC(異硫氰酸熒光素):綠色530nm

PE(藻紅蛋白):橙黃色575nm

PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):深紅色675nm

PI(碘化丙啶):橙紅色620nm488nm波長的氬離子激光激發(fā)

APC(別藻青蛋白):紅色660nm630nm波長的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā)

Cy3:激發(fā)波長488nm,最大發(fā)射波長570nm。

1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;

2)FL2通道檢測;

3)為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù),熒光強度低于PE。

Cy5:激發(fā)波長633/635nm,最大發(fā)射波長670nm。

1)其標記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀;

2)FL4通道檢測;

3)小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù),熒光強度低于APC。

4)與單核和粒細胞非特異性結(jié)合多,易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

(二)免疫熒光標記

常用的標記染色為直接免疫熒光染色和間接免疫熒光染色。在進行雙參數(shù)或多參數(shù)分析時,常常需要進行熒光抗體的組合標記,目前已經(jīng)有雙色、三色以及四色標記。

(三)細胞自發(fā)熒光

自發(fā)熒光信號為噪聲信號,在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在免疫細胞化學(xué)等測量中,對于結(jié)合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關(guān)鍵。一般說來,細胞成分中能夠產(chǎn)生自發(fā)熒光的分子(例如核黃素、細胞色素等)的含量越高,自發(fā)熒光越強;培養(yǎng)細胞中死細胞/活細胞比例越高,自發(fā)熒光越強;細胞樣品中所含亮細胞的比例越高,自發(fā)熒光越強。



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