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一文看懂細(xì)胞凋亡和細(xì)胞焦亡
2023-08-25

凋亡和焦亡的區(qū)別細(xì)胞凋亡與細(xì)胞焦亡同為細(xì)胞程序性死亡,均可出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚、核濃縮以及均依賴半胱天冬酶,但二者在諸多方面都大相徑庭,其具體區(qū)別如下:細(xì)胞凋亡細(xì)胞焦...

  • 2023-08-25

    什么是內(nèi)參?WesternBlot常用來比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對多少,因此必須先確定上樣量相同,才有比較的基礎(chǔ)。在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中,可能因總蛋白濃度測定不準(zhǔn)確,或是蛋白質(zhì)上樣時(shí)因操作產(chǎn)生誤差,所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來進(jìn)行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細(xì)胞或組織間表達(dá)相對恒定,且有高水平的表達(dá)量,來確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白,就稱為內(nèi)參,對應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。內(nèi)參在WB實(shí)驗(yàn)中的重要性1用于校正蛋白水平,確保不同樣品間蛋白定...

  • 2023-08-24

    Q1:配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)能否有血清的存在?血清的存在會(huì)影響脂質(zhì)體的形成,建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)采用無血清培養(yǎng)基(一般推薦MEM培養(yǎng)基)。Q2:轉(zhuǎn)染試劑能否凍存?不能。本試劑一定要4℃保存,要注意避免反復(fù)多次長時(shí)間開蓋,長時(shí)間開蓋會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。Q3:使用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?1)細(xì)胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳;2)使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率;3)制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑;4)轉(zhuǎn)染的時(shí)候...

  • 2023-08-24

    導(dǎo)讀FastBlockingWestern(快速封閉液)是最新一代的即用型、高效快速Western封閉液。封閉時(shí)間僅需10分鐘,效果優(yōu)于脫脂奶粉、BSA、酪蛋白等傳統(tǒng)封閉液,簡化了Western實(shí)驗(yàn)方案。該試劑不含有哺乳動(dòng)物來源的蛋白成分,避免與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。該試劑可與磷酸化的抗體以及NC膜和PVDF膜兼容。PART01封閉原理轉(zhuǎn)膜結(jié)束后,需對轉(zhuǎn)印膜進(jìn)行封閉。在轉(zhuǎn)印膜上未結(jié)合蛋白的位置,有許多非特異性的結(jié)合位點(diǎn),為避免其與抗體發(fā)生非特異性結(jié)合引起高背景,需使用含有惰性蛋白...

  • 2023-08-24

    1.Oligo(dT)Oligo(dT)是多聚胸腺嘧啶、T重復(fù)寡核苷酸,就是只有胸腺嘧啶組成的核苷酸鏈。因?yàn)镺ligo(dT)與mRNA的Poly(A)尾巴可以發(fā)生特異性結(jié)合,所以用Oligo(dT)特異結(jié)合到mRNA上Poly(A)尾端,因此,主要用于逆轉(zhuǎn)帶有Poly(A)尾的mRNA。例如模板為真核生物來源,Oligo(dT)可與mRNA的3’Poly(A)尾配對,有利于長鏈或全長mRNA的逆轉(zhuǎn)錄。但是,其對RNA樣品的質(zhì)量要求較高,不允許其降解,否則全長cDNA合成量會(huì)...

  • 2023-08-24

    mRNA疫苗相關(guān)產(chǎn)品-起發(fā)生物一、mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊:mRNA制備和脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊,可以類比為“原料藥”(mRNA)的生產(chǎn)和純化,以及“制劑”(利用脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封)階段。原料藥(mRNA)生產(chǎn)涉及DNA原液制備和mRNA原液的制備,mRNA原液的制備(體外轉(zhuǎn)錄),是整個(gè)mRNA工藝流程中核心的步驟,而原料主要是酶。(一)mRNA疫苗的生產(chǎn)mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊,原料藥(mRNA)的生產(chǎn)以及制劑(利用脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封)階段。mRN...

  • 2023-08-24

    細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀(jì)初,歷經(jīng)一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展,現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來越重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。由于細(xì)胞的特殊性,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,或在細(xì)胞建株和建系過程中,隨著傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞的各種生物特性都會(huì)逐漸發(fā)生變化。因此,原始細(xì)胞種子的及時(shí)保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中,雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存,是bi不可少的操作。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,在細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異...

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